为了保证样品在液相色谱仪流动相中不会被析出，应选择流动相的pH值在样品PKa的2个pH值（上下各1个pH）范围以外，也就是**是大于5.5或低于3.5。另外鲁创分析色谱工程师个人认为要注意以下3个方面：
1. 所选用流动相一定要能将峰检出——这个是基础条件，相信大家都知道，这个是**位的。
2. 流动相如为缓冲液，它的pH值应在它本身PKa的上下1个pH值内，如超出此范围，缓冲作用将大大减弱。
3. 我们使用的检测柱一般是C18，但使用C18柱时，流动相的pH值应在2~8之间，否则对柱子伤害较大。
根据以上要求，请选择适合自己实验的液相色谱仪流动相。
C18反相柱对非极性的物质保留充分峰形对称，所以如果你的化合物是弱酸，在流动相pH<pKa-2 时，弱酸就会基本以游离态存在，呈非极性，达很好保留出很好峰形！所以你的流动形相就的选择2~2.5。当溶液PH值等于化合物的pKa时，化合物半解离。在pKa±1.5的范围内，保留随PH值的变化而变化，超过此 PH值范围，化合物完全解离或不解离，保留随PH值的变化很小。
了解化合物的pKa值，可在pKa±1.5的范围内调节流动相的PH值，以改变其保留，达到成分分离的目的。或者，使流动相PH值超出这一范围，以保持保留的恒定，使建立的方法具有耐用性。根据分析化学,当弱酸(弱碱)溶液中溶液中离子浓度是分子浓度的100倍时,可以认为是完全电离的，化合物完全以离子形式存在；当弱酸(弱碱)溶液中溶液中分子浓度是离子浓度的100倍时，可以认为是完全不电离的，化合物以分子形态存在。
因此，为了防止HPLC有效液相色谱仪中峰的拖尾，应当保证化合物全部以分子或离子形态存在，即溶液的pH 值应与pKa有2个单位的差别(pH≥pKa±2)。如果化合物的pKa是4.5，溶液的pH值至少应该是2.5或6.5。考虑到色谱柱的耐受性(pH=2~8; 甚至是2.8~4.5)保留时间样品的复杂性要求，理论上你可以选择低pH值的流动相(pH2.5)，也可以选择高pH值的流动相(pH6.5).至于*终选哪一个，做个对比就ok了。一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于拥有纯品和低毒性等特征。
